保存青年 - MC3T3-E1细胞冻存

背景介绍：MC3T3-E1是一种来自小鼠成骨细胞系的细胞，通常被用来研究成骨细胞的分子生物学及生物化学机制。由于其易于培养和增殖，已经成为人们进行骨生物学研究的常见细胞系。然而，在科研过程中，常常需要保存、传代及分配这些细胞，而细胞冻存是一种广泛应用的方法之一。

冻存前准备

1. 培养: 在进行冻存之前，必须确保细胞状态良好，需要进行培养。可以使用含有10%灭菌胎牛血清的培养基，保持细胞密度在80% - 90%之间，避免细胞被过度生长而涣散。

2. 添加冻存液: 冻存液除了可以保护细胞外，还可以将其一定程度上防止细胞老化。在添加冻存液之前，冻存液应在无菌条件下制备，包括一定比例的FBS，DMSO和细胞培养基。将细胞与冻存液混合均匀，使细胞悬浮于冻存液中。

3. 冷藏: 细胞在与冻存液混合后，应在2-8°C的环境下冷藏20分钟，以便让冻存液充分渗透细胞。

冻存过程

1. 安排冷冻系统: 在进行冻存之前，需要准备一个冷冻系统，包括由干燥的液氮制成的冷筒、准备好的细胞冻存管以及干燥的薄膜。

2. 进行冷冻: 将细胞混合物移至冷冻管中，管的最大容量为1毫升，将管的盖子扭紧，最后用干燥的薄膜缠绕整个管子。将冰箱置于极低温度环境中冷冻至-196°C。

3. 冻存的保管:将已冻存的细胞混合物快速运输到备用冷冻罐中。在这一过程中需要保持细胞低于-130°C，并确保其在冷冻罐中处于均匀的温度环境中。

冻存后的注意事项

1. 冻存的时间问题: 细胞冻存的时间与液氮的保存时间有直接关系。一般来说，细胞冻存在-196°C的液氮罐中可以保存数年之久，不过最好在3年内使用。如果时间过久储存的细胞失活，则说明细胞冻存的操作存在问题。

2.细胞解冻: 细胞解冻需要一定技巧，预计在1-2分钟内进行。可以使用37°C的水浴或将细胞管置于温暖的手掌间，快速除去细胞的保护层。此后将细胞转移到充满细胞培养液的培养皿内，以保证它们在适当的温度和养分下继续生长。

3. 细胞分离: 在细胞解冻后，确保细胞完全分离，否则生长并不良好。可以使用3克氯化钠锁定细胞，轻轻摇动培养皿，然后用离心机将细胞与其他细胞分离开来并重新移植。

本文介绍了MC3T3-E1细胞的冻存过程，这是一种关键的技术，能够保证在处理高质量细胞的时候，有一份备份可以供使用者之后使用。尽管该过程不是非常复杂，但细胞的处理需要谨慎。需要保证实验操作过程的无菌和卫生型，以避免细胞污染或者杂交。